1.簡介 【1】

   T 細胞是一類多樣且重要的淋巴細胞，它們在胸腺中經歷陽性和陰性選擇變成熟。在主動免疫的兩個組成部分（即細胞介導免疫和一定程度上的體液免疫）中都發揮著重要作用。T 細胞有多種類型，最常見的類型是 CD4+ T 細胞（輔助性 T 細胞）和 CD8+ T 細胞（細胞毒性 T 細胞或殺傷性 T 細胞）。T 細胞不能識別可溶性的游離抗原。T 細胞只能識別基于蛋白質、與受體結合的抗原。這種識別是通過使用 MHC（也稱為 HLA）1 和 2 受體來實現的，它們與 TCR（T 細胞受體）一起與相關抗原結合，形成一個復合體，使 T細胞能夠識別抗原。CD4+ T 細胞能識別與 MHC 2 結合的抗原，而 CD8+ T 細胞則能識別與 MHC 1 結合的抗原。

2.技術流程

2.1外周血單核細胞（PBMC）的分離

（1）采用含肝素鈉的無菌采集管收集人靜脈血10ml，并輕輕顛倒該管幾次混合均勻。

（2）取10ml Ficoll在50ml離心管中。

（3）使用自動移液器輕輕地分層的血液在Ficoll的頂部。 分層應該非常緩慢，血液和Ficoll應該保持為兩個不同的層。

（4）4℃下，升1降1，900g，離心30min。

（5）離心完成后吸取 PBMC 細胞層的細胞，轉移至50ml離心管中，在離心管中加入 等體積的1640 培養基，使用吸管輕柔吹打細胞懸液3-5次，重懸細胞。

（6）4℃下，400g，離心5min，收集PBMC細胞沉淀備用。

2.2抗CD3抗體包被

（1）用無菌 PBS 稀釋抗 CD3 抗體（濃度為 1 μg/ml），然后在6孔板中包被抗 CD3 抗體，每孔添加2ml包被液，將培養板放入 5% CO2 培養箱中，在 37°C 下孵育 2小時。

（2）2 小時后，從培養箱中取出 6 孔板。吸出抗 CD3 溶液并丟棄。不要清洗培養板備用。

2.3外周血T淋巴細胞的活化培養

（1）取PBMC細胞沉淀，加1640培養基（含10%滅活FBS+2 mM L-谷氨酰胺+ 5 μg/ml的抗 CD28+1%雙抗）重懸至5x105個細胞/ml。

（2）按照每3m/孔，接入到包被好的6孔板中。

（3）置于37℃，5%CO2培養箱中培養。

（4）每3天補液1次，觀察外周血T淋巴細胞的活化培養情況并繪制生長曲線。

3.T淋巴細胞在腫瘤中的研究進展【2】

CD4+ T 淋巴細胞通過一系列機制參與調節腫瘤的固有和適應性免疫。依據其功能不同可劃分為多個亞群，主要包括 Th1、Th2、Th17 等【3】。CD8+ T 淋巴細胞占外周血淋巴細胞的 24%~30%，其主要作用是直接殺傷靶抗原(如病毒和腫瘤細胞等)，因此被稱為細胞毒性 T 淋巴細胞(Cytotoxic T lymphocytes, CTL)。

目前普遍認為 CD8+ T 細胞被認為是抗腫瘤免疫的主要驅動因素，CD4+ T 細胞在腫瘤控制中也發揮著突出的作用，可以促進或抑制抗腫瘤反應【4-5】。大多數癌細胞不表達 MHC II 類分子(MHC II)，因此不能直接被 CD4T細胞識別，而是通過腫瘤基質細胞交叉呈遞腫瘤抗原來識別【6】。腫瘤浸潤性 CD8+ T 淋巴細胞的豐度和 T 的表達升高特征，與許多不同腫瘤類型患者的無病生存期或總生存期延長顯著相關，包括乳腺癌、肺癌、結直腸癌、黑色素瘤、頭頸癌、食管癌、胃癌、肝細胞癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮內膜腺癌和膀胱癌。腫瘤特異性 CD8+ T 淋巴細胞可以通過產生細胞毒性分子以 MHC-I 限制的方式直接殺死腫瘤細胞【7】。

4.參考文獻

【1】Sauls RS, McCausland C, Taylor BN. Histology, T-Cell Lymphocyte. [Updated 2023 May 1]. In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls

【2】陳飛, 晏冬. T淋巴細胞在腫瘤中的研究進展[J]. 臨床醫學進展, 2024, 14(4): 3012-3020.

【3】Basu, A., Ramamoorthi, G., Albert, G., et al. (2021) Differentiation and Regulation of TH Cells: A Balancing Act for Cancer Immunotherapy. Frontiers in Immunology, 12, Article 669474.

【4】Poncette, L., Bluhm, J. and Blankenstein, T. (2022) The Role of CD4 T Cells in Rejection of Solid Tumors. Current Opinion in Immunology, 74, 18-24.

【5】Kim, H.-J. and Cantor, H. (2014) CD4 T-Cell Subsets and Tumor Immunity: The Helpful and the Not-So-Helpful. Cancer Immunology Research, 2, 91-98.

【6】Ohshima, K. and Morii, E. (2021) Metabolic Reprogramming of Cancer Cells during Tumor Progression and Metastasis. Metabolites, 11, Article 28.

【7】Martinez-Usatorre, A., Carmona, S.J., Godfroid, C., et al. (2020) Enhanced Phenotype Definition for Precision Isolation of Precursor Exhausted Tumor-Infiltrating CD8 T Cells. Frontiers in Immunology, 11, Article 340.